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LGR“细胞液中同位素分析测量方法”在美获准专利

日期: 2012-08-23
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2012年1月,由LGR公司发明的专利Method For Analysis Of Isotopes In Bodily Fluids(专利号:9110008)在美国获得批准。专利发明人Douglas Steven Baer及其伙伴创造性的应用LGR水同位素分析仪912-0032,成功的测量了生物体细胞液中的氢氧同位素δ18O, δ17O和δ2H。该方法区别于传统的同位素比质谱仪法,不会在对样品的前处理过程中产生分馏,同时,测量结果也不会受到细胞液中其他物质的干扰。
其基本前处理方法如下:
将30~250 μL(典型为200 μL)的样品加入到离心管中,加入5 mg ZnSO4,以8000rpm的转速离心10 min,取10~75 μL上清液,然后直接用LGR水同位素分析仪(912-0032)进行测定。加入ZnSO4是为了沉淀蛋白质,原理是金属离子对蛋白质有亲和作用,可以引发形成蛋白质交联,形成沉淀,也可用到其他金属离子如(Ca / Al / Cu),阴离子一般用氯化物或者是硫酸根。同时,该专利中还提到,以前的一些分离蛋白质的方法不适合用此设备,具体方法如下:
1、用盐析来沉淀蛋白质,盐析去除效率只有90%,并不完全,并且高浓度的盐本身对测试结果会有影响;
2、有一种称之为Cohn process的方法,通过加入乙醇或者其他有机溶剂(甲醇、丙酮、乙二醇、三氯乙酸、肼)来沉淀蛋白质,乙醇的加入导致PH降低,蛋白质被沉淀下来,但是乙醇或其他类似有机溶剂中的H会与H2O中的H发生置换反应,影响测定结果,这可能就是之前提到的为啥醇类物质对测定结果会有影响的原因;
3、通过有机聚合物来沉淀蛋白质,该有机物通常是聚乙二醇,同上,同样不适用;
4、通过加酸到样品中,与蛋白中的氨基形成不溶性的盐,但是酸化后形成的NH4+中的H同样会与H2O发生置换反应;
5、絮凝。通过加入藻酸盐、角叉菜胶、单宁酸来去除蛋白质,该方法产生的效应与Cohn process一样。


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